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      組織搗碎機在生化制備中常用的方法

      發布時間: 2022-01-07  點擊次數: 318次
       在生化制備中常用的方法有: 
      1. 反復凍溶法 原理:因突然冷凍,細胞內冰晶的形成及胞內外溶劑濃度的突然改變而破壞細胞。 方法:將待破碎的細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復幾次,由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎。 特點:此法適用于組織細胞,多用于動物性材料,對微生物細胞作用較差。 
      2. 急熱驟冷法 將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細菌及病毒材料。
      3. 超聲波處理 用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂,此法多適用于微生物材料,用大腸桿菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度,頻高于15~20KHz的超聲波在高強度聲能輸入下可以進行細胞破碎。其破碎機理:可能與空化現象引起的沖擊波和剪切力有關。超聲破碎的效率與聲頻、聲能、處理時間、細胞濃度及首種類型等因素有關。 行細胞破碎。其破碎機理:可能與空化現象引起的沖擊波和剪切力有關。超聲破碎的效率與聲頻、聲能、處理時間、細胞濃度及首種類型等因素有關。 特點:操作簡單,重復性較好,節省時間;多用于微生物和組織細胞的破碎。 存在問題:超聲波破碎在實驗室規模應用較普遍,處理少量樣品時操作簡便,液量損失少,但是超聲波產生的化學自由基團能使某些敏感性活性物質變性失活。而且大容量裝置聲能傳遞,散熱均有困難,應采取相應降溫措施。對超聲波敏感和核酸應慎用??栈饔檬羌毎茐牡闹苯釉?,同時會產生活性氧,所以要加一些巰基保護劑。 
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